گزارشکار آزمایشگاه بیوشیمی 2 «اندازه گیری اسید اوریک خون»

برای مشاهده به ادامه ی مطلب مراجعه نمایید

آزمایش 7:اندازه گیری اسیداوریک خون Acid uric

وسایل مورد نیاز برای آزمایش :                                                               

1 –لوله آزمایش

2 –معرف شماره1

3 –محلول استاندارد

4 -  سمپلر 100 میکرولیتری

5 – نمونه سرم

6 –معرف رنگزا

7 –بنماری

8 –اسپکتروفوتومتر

هدف: اندازه گیری اسیداوریک خون

اساس آزمایش:

اسیداوریک از کاتابولیسم بازهای آلی وآدنین و گوانین ایجاد می شود در PH های قلیایی اسیداوریک به فرم اورات تبدیل می شود که حلالیت بیشتری در آب دارد ولی در PH های کمتر از 6 به فرم اسیداوریک وجود دارد که حلالیت کمتری دارد و در مجاری ادراری رسوب می کند افزایش اسیداوریک خون هیپراورسیمی نامیده می شود که ممکن است به دلیل اختلالات متابولیسم پورین ها ایجاد شود ( هیپراوریسمی اولیه ) و یا به دلائل دیگر نظیر کاهش دفع در ادرار ایجاد شود که هیپراوریسمی ثانویه نامیده می شود .

روش های اندازه گیری اسیداوریک  :   

اندازه گیری اسیداوریک به روش آنزیمی : دقیق ترین وحساس ترین روش است وروش های  دیگر اندازه گیری اسیداوریک با روش آنزیمی تطبیق داده می شود با این وجود رنگ سنجی فسفوتنگستات در اکثر آزمایشگاههای بالینی مرسوم تر است در روش آنزیمی اسیداوریک به کمک آنزیم اوریکاز به آلانتوئین و     ( آب اکسیژنه ) تجزیه می گردد و جذب نوری محلول در طول موج nm 290 کاهش می یابد میزان کاهش جذب نوری به مقدار اسیداوریک نمونه بستگی دارد .

اندازه گیری به روش فسفو تنگستات : در این روش اسیداوریک در محیط قلیایی توسط اسید فسفو تنگستیک اکسید شده وبه آلانتوئین و دی اکسید کربن تبدیل می گردد در این واکنش خود اسید فسفو تنگستیک احیا شده وبه ترکیبی به نام آبی تنگستن تبدیل می گردد که در طول موج 640 nm جذب دارد شدت رنگ حاصل ومیزان جذب با مقدار اسیداوریک پلاسما رابطه ی مستقیم دارد .

اسیداوریک                        آلانتوئین   +  CO2

اسید فسفو تنگستیک        آبی تنگستن

روش انجام آزمایش :

دو  لوله آزمایش برداشتیم سپس روی لوله اول تست وروی لوله دوم استاندارد نوشتیم بلانک در این آزمایش آب مقطر است سپس درون هر دو لوله دو میلی لیتر از معرف شماره 1  ریختیم سپس صد میکرولیتر از محلول استاندارد به لوله استاندارد اضافه کردیم سپس صد میکرولیتر از نمونه سرم به لوله تست اضافه کردیم بعد از این مراحل سه لوله را تکان دادیم تا محتویات درون آنها مخلوط گردد سپس نیم میکرولیترمعرف رنگزا داخل لوله های نمونه و استاندارد اضافه کردیم سپس لوله ها را  10 دقیقه در 37 درجه سانتیگراد قرار دادیم سپس توسط اسپکتدوفوتومتر جذب آنها را در طول موج 640 nm قرائت کردیم وسپس غلظت اسید اوریک خون را توسط فرمول زیر محاسبه کردیم : 

غلظت اسیداوریک

جذب استاندارد                          جذب نمونه

غلظت اسیداوریک

ادرار باید ابتدا به نسبت یک به ده با آب مقطر رقیق شده و غلظت بدست آمده در عدد ده ضرب گردد .

مقدار نرمال اسیداوریک درمردان3.5 تا7.5در زنان2/5 تا 6/5میلی گرم بر دسی لیتر است  و مقدار آن در نمونه ادرار 24 ساعته 250 تا 750 میلی گرم در24 ساعت است .  

تفسیر:

آزمایش آخر :اندازه گیری اوره خون ( نیتروژن اوره خون ) ( BUN )

وسایل مورد نیاز برای آزمایشاندازه گیری گلوکز خون :

1 –لوله آزمایش

2 –معرف شماره1

3 –محلول استاندارد

4 -  سمپلر 20 میکرولیتری

5 – نمونه سرم

6 –معرف شماره 2

7 –بن ماری

8 –اسپکتروفوتومتر

مقدمه:

آمونیاک که معمولا از اسیدهای آمینه در بدن تشکیل می شود برای تمامی حیوانات سمی است بنابراین آمونیاک در کبد به میزان زیادی به ترکیب غیرسمی به نام اوره تبدیل می گردد .

نیتروژن غیر پروتئینی ( NPN) : تمام ترکیبات نیتروژن دار که پروتئین نیستند شامل اوره و اسیداوریک و کراتینی و کراتینین وغیره جزء NPN  هستند. اندازه گیری این ترکیبات در تشخیص افتراقی بیماری های کلیه و کبد مهم است مقدار طبیعی NPN   در سرم 20 تا 35 میلی گرم بر دسی لیتر است ومقدار نیتدوژن اوره ( BUN) حدود 45 درصد از NPN را تشکیل می دهد بنابراین مقدار BUN در سرم 8 تا 18 میلی گرم بر دسی لیتر است . برای اندازه گیری اوره ابتدا BUN اندازه گیری شده و در عدد 2.14 ضرب می شود .

BUN 2.14 = اوره                         اوره  2.14 = BUN

روش های اندازه گیری اوره :   

در اندازه گیری اوره به روش آنزیمی اوره آز اوره توسط این آنزیم به آمونیاک تبدیل می شود سپس آمونیاک توسط واکنش برتلو اندازه گیری می شود واز روی آن غلظت اوره محاسبه می گردد . درروش قدیمی دیگری به نام روش کوارسکی نیتروژن اوره در دستگاه مخصوصی آزاد می شود و از حجم گاز ازت خارج شده مقدار اوره تعیین می گردد . کجلدال یا کلدال : این روش بسیار قدیمی است روش دی استیل منواکسیم : در این روش ماده ی دی استیل منواکسیم در محیط اسیدی با آب ترکیب شده و تولید دی استیل می نماید که در اثر ترکیب شدن با اوره مشتق زردرنگی به نام دیازین ایجاد می شود البته حضور ترکیبی به نام تیوسمی کاربازید در محیط آزمایش باعث پیدایش رنگ صورتی پررنگ می شود شدت رنگ حاصل ومیزان جذب با غلظت اوره نسبت مستقیم دارد .

روش انجام آزمایش :

سه لوله آزمایش برداشتیم سپس روی لوله اول تست وروی لوله دوم استاندارد و روی لوله سوم بلانک نوشتیم سپس درون هر سه لوله 1.2 میلی لیتر از معرف شماره 1  ریختیم سپس درون هر سه لوله 1.2 mlاز معرف شماره 2 ریختیم  سپس بیست میکرولیتر از محلول استاندارد به لوله استاندارد اضافه کردیم سپس بیست میکرولیتر از نمونه سرم به لوله تست اضافه کردیم بعد از این مراحل سه لوله را ده دقیقه در 100 درجه سانتیگراد قرار دادیم سپس توسط اسپکتروفوتومتر جذب آنها را در طول موج 520 nm قرائت کردیم وسپس غلظت گلوکز نمونه را توسط فرمول زیر محاسبه کردیم : 

BUNغلظت

جذب استاندارد                          جذب نمونه

  BUNغلظت

BUN 2.14 = 18.4

مقدار نرمال BUN8 تا 18 و اوره 15تا 40 میلی گرم بر دسی لیتر است .