گزارشکار آزمایشگاه بیوشیمی 2 «اندازه گیری HDL»

برای مشاهده به ادامه ی مطلب مراجعه نمایید

 

 

موضوع:انداز گیری غلظت کلسترول HDL

مقدمه:

لیپوپروتئین خون و فعالیت جسمی لیپوپروتئین ها همان طوری که از ظاهر واژه مشخص است، از نوعی چربی مرکب بوده و مجموعه ای است از چربی و پروتئین ها. از جهت وزن ملکولی، اندازه و نوع عمل، انواع مختلفی دارند که عبارتند از: شایلو میکرون ها، لیپوپروتئین ها دانسیته ی بسیار پایین، با دانسیته ی پایین، لیپوپروتئین با دانسیته ی بالا و اسیدهای چرب آزاد. ● چربی و لیپوتروتئین ها مراد از چربی ها در تحقیق، کلسترول تام و تری گلیسرید است که شامل چربی های ساده و استرول ها می باشد. لذا برای درک بیشتر به تعریف و تقسیم بندی چربی ها و آنهایی می پردازیم که مورد نظر می باشند. ۱ چربی های ساده: چربی های طبیعی/ موم ها ۲ چربی های مرکب: فسفولیپیدها/ گلیکولیپیدها/ لیپوپروتئینها ۳ استرول ها یا استروئید الکل ها که شامل کلسترول و استرها، استروئیدها و اسیدهای صفراوی هستند. در تعریف باید گفت که گروهی از مواد آلی هستند که در آب نسبتا غیرقابل حل می باشند. اما در الکل، اتر وکلروفرم و دیگر حلال های چربی حل می شوند و هر یک از آن ها دارای ظاهر چرب می باشند. گروه چربی به ویژه تری گلیسرید TG و کلسترول تام TC به راحتی بعد از مصرف از طریق مواد غذایی و تجزیه و تحلیل و نیز استریفیه شدن آنها به شکل دیگری در بدن ذخیره می شوند و بعداً می توان از آنها به عنوان انرژی در مواقع ضروری بهره گرفت، علاوه بر مصارف انرژی در ساخت سلول، ساختمان چربی ها حائز اهمیت است.         لیپوپروتئینهای خون ترکیبی متشکل از لیپیدها و آپولیپوپروتئین‌ها هستند که به واسطه وجود آنها، چربی‌ها در خون گردش می‌یابند.مولکولهای حاملی از جنس پروتئین موسوم به آپوپروتئین ها هنگامی که با کلسترول وتری گلیسریدها ترکیب میگردد به لیپوپروتئین ها تبدیل میشوند. چگالی و یا وزن مخصوص هر کدام از لیپوپروتئین ها با میزان پروتئین موجود در آنها تعیین میگردد. لیپو پروتئین ها سه کار عمده انجام میدهند : 1- تری گلیسیریدهایی را که درنتیجه هضم و جذب غذا حاصل شده اند به بافت ها انتقال می دهند. 2- تری گلیسیریدهایی را که در کبد وجود دارند در موقع لزوم برای تامین انرژی به دیگر بافت ها منتقل می کنند. 3- برداشتن کلسترول اضافی از بافت ها نقش آپولیپوپروتئین ها : 1-      به عنوان یک جز لیپوپروتئین به کار میرود .2-      شناسایی گیرنده های سطحی غشا 3-      فعال کردن آنزیم های مربوط به متابولیسم پروتئین ها  انواع آپولیپوپروتئین ها :  APO E-APO A- APO B100- APO C1 - انواع لیپوپروتئین: 1- لیپوپروتئین با چگالی خیلی کم Very Low density Lipoprotein (VLDL): حاوی 10 درصد پروتئین، 60-40 درصد تری گلیسرید و 20 -15 درصد کلسترول میباشد. این کلسترول پس از انتقال تری گلیسریدهای خود به عضلات و بافت های چربی به LDL تبدیل میشود. 2- لیپوپروتئین با چگالی کم Low -density Lipoprotein   (LDL): حاوی 20 درصد پروتئین، 45 درصد کلسترول و 15-10 درصد تری گلیسرید میباشد. وظیفه حمل 75 درصد کلسترول به بخشهای (سلولهای) مختلف بدن را به عهده دارد.LDL کلسترول "بد" خوانده میشود.LDL به جدار عروق چسبیده و رسوب میکند. همچنین سطح اکسید نیتریک خون را کاهش میدهد. نیتریک اکساید اجازه میدهد خون آزادانه در رگها جریان یابد. از لیپوپروتئین هایی است که از لحاظ تشخیص کلینیکی و بالینی دارای اهمیت بسزایی هستند و همان بتالیپوپروتئین می باشند، که نمایانگر مرحله ی نهایی تجزیه ی لیپوپروتئین با دانسیته ی خیلی پایین است. به عنوان یک عامل خطر و افزایش دهنده ی بیماری قلب و عروق و تصلب شرائین قلب می باشند. افزایش این لیپوپروتئین در جریان خون به پیشرفت و توسعه ی عارضه فوق کمک می کند که عمدتاً در اثر تغییرات غیرطبیعی در متابولیسم و یا سوخت و ساز چربی ها ایجاد می شود. این دسته از لیپوپروتئین‌ها کلسترول را به بافتهای خارج کبدی انتقال می‌دهند. مقادیر سرمی بیش از حد این چربی‌ها ارتباط مستقیم با بروز بیماری کرنری قلبی دارد. 3- لیپوپروتئین با چگالی زیاد  High-density Lipoprotein (HDL): حاوی 50 درصد پروتئین، 20-15 درصد کلسترول و 5 درصد تری گلیسرید میباشد. وظیفه بازگرداندن کلسترول از سطح خون  به کبد را به عهده دارد. (با چسبیدن به LDL آن را از جدار عروق پاک میکند). که یا در کبد به اسید های صفرایی تبدیل گردیده و یا مجددا مورد استفاده قرار میگیرد.HDL کلسترول "خوب" خوانده میشود چراکه محافظت از جدار عروق را به عهده دارد. از لیپوپروتئین هایی است که از لحاظ تشخیص کلینیکی و بالینی دارای اهمیت بسزایی است و همان آلفا لیپوپروتئین می باشد، در ساخت و تجزیه ی لیپوپروتئین های بادانسیته ی خیلی کم و شایلومیکرون ها دخالت داشته و نیز در ساخت کلسترول و تبدیل آن به نوع استریفیه نقش دارند، همین طور نیز از آن به عنوان عامل ضد خطر بیماری های قلب و عروق (CHD) یا آرترواسکلروز یاد می کنند. این دسته از لیپوپروتئین‌ها کلسترول را از بافتهای خارج کبدی به کبد بمنظور دفع در صفرا تسریع می‌کنند. میزان مناسب این نوع لیپوپروتئینها در خون، خطر ابتلا به بیماری کرنری قلبی را کاهش می‌دهد. 4- لیپو پروتئین با دانسیته متوسط : (IDL) Intermediate- density Lipoprotein که به لیپو پروتئین با دانسیته کم تبدیل می‌شود. 5- شیلو میکرون و یا کیلومیکرون(CHYLOMICRON): کلسترول همچون دیگر چربی ها و روغنها محلول در آب (خون) نبوده و به کمک یک پروتئین خاص موسوم به لیپوپروتئین ها LIPOPROTEINS و ترکیب با آنها در جریان خون انتقال می یابد. کلسترول و تری گلیسریدها پس از جذب از روده ها درون یک پوشش پروتئینی بنام شیلو میکرون و یا کیلومیکرون(CHYLOMICRON) بسته بندی میگردند. در واقع به مجموعه تری گلیسریدها و کلسترول که با پوشش لیپوپروتئینی احاطه گشته اند شیلومیکرون میگویند که 90 درصد آن از تری گلیسریدها و تنها 10 درصد آن را کلسترول تشکیل داده است. نکته: 85 درصد کلسترول در کبد به اسیدهای صفراوی، 10 درصد به ترکیبات استروئیدی و 5 درصد به ویتامین D( در حضور آنزیمهای خاص و نور خورشید) تبدیل میگردد. سیکل زندگی شیلو میکرون ها : یکی از انواع لیپو پروتئین ها میباشند که در سلولهای مخاطی روده پس ازصرف غذا سنتز میشوند وباعث انتقال تری گلیسریدهای غذایی که در روده میباشند به سایر بافت ها میشوند . بزرگترین (حجیم ترین )‌وسبک ترین لیپو پروتئین هاست مقدار تری گلیسرید موجود در ساختمان آن 85% ومقدار کلسترول 3% کلسترول آزاد 1% وفسفولیپید 9% میباشد . و2% ساختمان آن را پروتئین تشکیل میدهد . شیلومیکرون ها در شبکه آندوپلاسمی سلولهای مخاطی روده سنتز شده واز طریق سیستم لنفاتیک وارد جریان خون میشوند (سیاهرگ سابکلاوین چپ) . آپولیپوپروتئین های شرکت کننده در ساختار شیلومیکرون ها عبارتند ازapo B48  (مخصوص شیلومیکرون ) ، AIV   , CII, CIII,apoE   می باشند. آپو CII باعث فعال شدن آنزیم لیپوپروتئین لیپاز در مویرگهای که درلایه اندوتلیال مویرگها  بافت های چربی ،قلبی ، ماهیچه اسکلتی وبافت های تولید کننده شیر میشود . . فعال شدن آنزیم لیپوپروتئین لیپاز LPL باعث آزاد شدن اسیدهای چرب به داخل بافتهای نامبرده میشود . البته در بافت کبدی وجود ندارد در بافت چربی انسولین باعث افزایش غلظت آنزیم لیپوپروتئین لیپازمی شود. تزریق هپارین  باعث رهایش آنزیم لیپوپروتئین لیپازاز بافتها به داخل جریان خون میشودو لیپیدمیا را شفاف می کند.این اثر را post heparin lipolytic activity  گویند بنابراین شیلومیکرون ها باعث حمل اسیدهای چرب غذایی به بافتهای مصرف کننده یا ذخیره کننده چربی میشوند .جایگاه اصلی متابولیسم شیلومیکرونها بافت چربی وماهیچه اسکلتی است . پس از اینکه مقدار زیادی TG های شیلومیکرون ها به داخل بافت ها رها شدندو آپو  A , C   و فسفولیپدها از سطح انها ازاد شدند،باقیمانده ساختمان شیلومیکرون ها را بقایای شیلومیکرون یا Remenant chylگویند که حاوی کلسترول یا,apo E B48میباشند .بقایای شیلومیکرون ها با گیرنده موجود در سطح سلولهای کبدی ترکیب شده واز طریق اندوسیتوز وارد سلولهای کبدی میگردد .آپو E  لیگاندی برای گیرنده ها میباشد اگر سرم لیپمیک (Lipemic) حاوی چربی بالا به مدت یک شب در یخچال گذاشته شود ،یک لایه شیری رنگ در بالا ایجاد میشود که آن را شیلومیکرون مینامند . وقتی که شیلومیکرون ها در سلولهای مخاطی روده سنتز میشوند،فقط دارای apoB48,apoA  میباشند ولیکن زمانی که آنها در پلاسما و لنف هستند Apo –E , ApoC  از HDL به آنها اضافه میشوند . نیمه عمر شیلومیکرون ها حدود یک ساعت است . لیپوپروتئین لیپاز(LPL ) در بافت کبدی وجود ندارد نبود apoCII  باعث کاهش فعالیت LPL  ودر نتیجه تجمع شیلومیکرون ها و VLDL در خون خواهد شد . لیپوپروتین های خیلی سبک  ( VLDL) Very low Density Lipoprotein وIDL: VLDL توسط کبد سنتز میشود و تری گلیسریدهای داخلی  رابه بافت ها انتقال میدهدو دارای نیمه عمر حدود 3-1 ساعت است . وقتی که رژیم غذایی مصرفی دارای مقادیر زیادی اسید چرب (مازاد بر احتیاج ) باشد . مقدار اضافی نیز در سلولهای کبدی تبدیل به تری اسیل گلیسرول شده وبه شکل VLDL منتقل میشود. مقادیر اضافی کربوهیدرات موجود در کبد میتواند به تری اسیل گلیسرول تبدیل شده به شکل VLDL انتقال یابد. لیپوپروتین های خیلی سبک  شامل :  تری گلیسرید (50% )  12% کلسترول استر ،7% کلسترول آزاد ،18% فسفولیپدو10% پروتئین است . آپولیپوپروتئین های موجود در ساختار VLDL : CIII,CII,apo CI,  apoB100وآپوE میباشد. این لیپوپروتئین ها از کبد به جریان خون وسپس به ماهیچه وبافت چربی وارد میشوند . آپو پروتئین CII باعث فعال شدن لیپوپروتئین لیپاز در بافت های نامبرده میگردد که منجر به رها شدن اسیدهای چرب از ساختار VLDL به بافت های چربی و ماهیچه ای می شوند. باقیمانده ایجاد شده را (IDL Intermediate Density Lipoprotein)    مینامند که حاوی TG  کمترو کلسترول بیشتری نسبت به VLDL  می باشند ودر عین حال آپو B100 و آپو E   دارند. سلولهای بافت چربی باعث برداشت اسیدهای چرب شده وآنها را مجدداٌ تبدیل به تری اسیل گلیسرول مینمایند . سلولهای بافت ماهیچه ای بر خلاف سلولهای چربی ، اسیدهای چرب را به منظور تامین انرژی اکسید مینماید. نیمه عمر VLDLبرابر با 3-1 ساعت است . آپو E  یک پروتئین غنی از آرژنین است که در شیلو میکرون ها وجود داردبه موجب  آن بقایای شیلو میکرون ها بوسیله سلولهای کبدی برداشته میشوند  . آپو  E نیز لیگا ندی برای برداشت IDL   توسط سلولهای کبدی است . apoE نیز ایزو فرمهای I,II,III,IV   دارد. آپو  E IVنیز درایجاد بیماری آلزایمرAlzeheimer موثر است . آلل apoE IV   نیز در   15% مردم دیده میشود واگر به شکل هموزیگوت باشد میزان شیوع آلزایمر هفت برابر میزان عادی شیوع آن خواهد شد . وافراد نیز در سن کمتر از 70 سال به این بیمارری مبتلا میشوند. قسمت اعظم بقایای VLDL بوسیله سلولهای کبدی از جریان خون برداشته میشود . مکانیزم برداشت VLDLتوسط سلولهای کبدی مشابه شیلومیکرون هاست وحضور آپوE نیز ضروری است . از دست دادن مقداری TGاز ساختمان VLDLمنجر به ایجاد ترکیباتی به نام Intermediate Density  lipoprotein (IDL)ویا remenantsمیشود .رها شدن مقادیر زیادتری از TGموجود در ساختار VLDL باعث بوجود آمدن دسته ای دیگر از لیپوپروتئین ها به نام LDL میشود .تبدیل VLDL  به IDL  و سپس به LDL  را Lipoprotein Cascade Pathway   گویند. لیپوپروتئین با چگالی کم Low -density Lipoprotein   (LDL): مهمترین ناقل کلسترول در جریان خون می باشد که فقط دارای آپو B100  می باشد.  . نیمه عمر آن 2 روز بوده وزن مخصوص آن در حدود 1.063-1.006 می باشد. متشکل از 10 در صد تری گلیسرید، 37% کلسترول استر ،  8% کلسترول آزاد ،20% فسفولیپید و 23% پروتئین میباشد. بنابر این LDL  غنی از کلسترول می باشد.آپولیپوپروتئین های شرکت کننده در ساختار آن apoB100 می باشد.غالب ذرات آن از VLDL  و قسمت کمی از آن از کبد منشا دارد.وباعث انتقال کلسترول از کبد به بافت های مختلف می باشد.گیرندهای  LDL  در اغلب سلولها وجود دارد بخصوص در سلولهلی کبدی و کورتکس آدرنال به میزان زیادی وجود دارد. apoB100 یک گلیگوپروتئینی است که دارای 4536 اسید آمینه میباشد که با گیرنده LDL باند میشود البته درسطح VLDL   نیز100 apo B  وجود دارد ولی ناحیه اتصالی برای باندشدن باگیرنده LDL دردسترس نیست ولی تبدیل VLDLبه LDL نیز ناحیه اتصالی گیرنده 100 apoB نیز نمایان میشوند. کلسترولی که بدین طریق وارد سلولها میشود می توانددرساختار غشا شرکت نمایدویا به وسیله آنزیم ACAT نیز مجددا" استریفیه میشود وسپس در داخل سیتوزل ذخیره شود .وقتی که مقادیر زیادی در داخل سلول موجود باشد میزان سنتز نیز کاهش می یابد . مهمترین نقش LDL  انتقال کلسترول از کبد به بافتهای محیطی وتنظیم سنتز داخل کلسترول میباشد. گیرنده های اختصاصی  LDL در منطقه مخصوصی از غشای پلاسمایی سلولهای خارج کبدی  به نام coated  pit. وجود دارند که شامل پروتئینی به نام کلاترین است . این گیرنده ها باعث شناسائی apo         B100   میشوند و بنابراین می توانند باعث برداشت درات LDL   شوند. کمپلکس گیرنده و LDL از طریق اندوسیتوز به داخل بلعیده میشوند و این وزیکول ها با لیزوزوم ها ترکیب میشوند (آنزیم های لیزوزومی (هیدرولیز کننده استرکلسترول ) باعث رهاشدن کلسترول واسیدهای چرب به داخل سیتوزول میشوند  وآپو B100 به اسیدهای آمینه متشکله تجزیه شده وبه داخل سیتوزول آزاد میشود ولی گیرنده های LDL تجزیه نمی شوندوبرای استفاده مجددبه سطح سلول برمیگردند(برداشت کلسترول ). وقتی که کلسترول به مقدار زیادی در داخل سلول باشد گیرنده های جدید LDL نیز ساخته نخواهد شد وبنابراین برداشت کلسترول اضافی از پلاسما نیز بلوکه میشود . غالب LDL از VLDL منشا میگیرد ولی مقدار کمی از آن مستقیما توسط کبد سنتز میشود.افزایش مقدار LDL در خون ارتباط مستقیمی با شیوع بیماریهای قلبی وعروقی دارد .گیرنده های LDLدر تمام سلول ها وجود دارد .ولیکن سلولهای کبدی وکورتکس آدرنال دارای مقادیر زیادی LDL است .کلسترول آزاد شده به داخل سلول دارای چندین سرنوشت به شرح زیر است : 1-      شرکت در ساختار غشای سلولی 2- در بافتهای کورتکس آدرنال وگونادها به هورمون های استروئیدی تبدیل میشود -3استریفیه شدن مجدد کلسترول وذخیره شدن استریفیه  شدن مجدد کلسترول به وسیله آنزیم ACAT  Acyl cholesterol acyl transferase که اسید چرب غیر اشباع با یک پیوند دو گانه مانند اسید اولئیک را مورد استفاده قرار میدهد . 4- خارج شدن کلسترول از سلول واستریفیه شدن آن با اسیدهای چرب غیر اشباع با چند پیوند دوگانه polyunsturafed. F.A به وسیله LCAT(lecitin   cholesterol   Acyl  transferase)   وانتقال به وسیله HDL وسرانجام از طریق کبد ترشح میشود  70 % LDL به وسیله سلول های کبدی تجزیه شده و30 % بقیه به وسیله بافتهای خارج کبدی تجزیه میشود . از آن جایی که کلسترول در بافتها رسوب پیدا میکند LDL  را کلسترول  بد میگویند . لیپوپروتئین با چگالی زیاد  High-density Lipoprotein (HDL): منشا HDL نیز در کبدوروده کوچک میباشد . HDL  نیز در کبد وروده کوچک سنتز میشود که ذره ای کوچک وغنی از پروتئین  (55%) ومقدار نسبتاٌ کمی کلسترول آزاد  و بدون کلسترول استر می باشد که در این حالت آنرا  Nascent گویند . در ابتدا فقط حاوی آپو A    است بعدا در کبد آپوهای E و C  نیز دریافت می کند.غلظت آن در خون تحت تاثیر سن ، جنس ، نژاد ، رژیم غذائی و فعالیت بدنی می باشد. در خانم ها بعلت وجود هورمون استروژن سطح HDL 2  بالاست در آقایان تا سن 55 سالگی به علت ترشح آندروژن HDL 2    به HDL 3  تبدیل میشود.به صورت معمول وقتی صحبت از HDL  ها می شود منظور نوع بارز انها یعنی HDL2   است . آپولیپو پروتئین های شرکت کننده در ساختار آن IV,apoCI,apoCII,apoCIII,APOD,APOE apoAI,AII میباشند . علاوه بر ترکیبات فوق در ساختار HDL آنزیمی به نام LCAT (lecetin-cholestrol-acyl transferase) وجود دارد که باعث تشکیل استر کلسترول از فسفا تبدیل کولین میشود LCAT. بر روی سطح HDL جدیداً تشکیل شده (nascent HDL) باعث تبدیل کلسترول به کلسترول استر میشود .سوبسترا برای LCAT ( فسفا تبدیل کولین شیلو میکرون ها وبقایای VLDL میباشد ) . ایجاد کلسترول استر که نا محلول در آب است منجر به تشکیل core ( لایه مرکزی ) میشود که باعث تغییر شکل HDL های تازه تولید شده (دیسک ) به HDL های بالغ وکروی میشود .این لیپوپروتئین  های غنی از کلسترول به کبد برمیگردند و باعث آزاد شدن کلسترول به داخل کبد میشوند و در آنجا تبدیل به نمکهای صفراوی میشوند HDL ممکن است از طریق اندوسیتوز با واسطه ی گیرنده به وسیله ی سلول های کبدی برداشته شوند. HDL میتواند به گیرنده های پروتئینی غشای پلاسمایی (در سطح بافت کبدی وبافت تولید کننده هورمون های استروئیدی ) اتصال یابد .مکانیزم انتقال به شکل اندوسیتوز نیست .میزان HDL رابطه ی معکوس با شیوع سکته ی قلبی دارد . نقش HDL | دو لیپوپروتئین LDL و HDL دو لیپوپروتئین مخالف هم هستند! زمانی که میزان LDL در پلاسما افزایش یابد خطرناک خواهد بود در حالی که افزایش HDL در پلاسما شاخص مثبت و خوبی برای سلامتی و کاهش ناراحتی های قلبی است. افزایش میزان HDL شاخص خوبی برای سیستم عروقی است به این علت که HDL کلسترول را از بافتها به کبد منتقل می‌کند تا از بدن خارج و یا بازسازی شوند. تغییرات فیزیولوژیکی در میزان لیژوژروتئین‌ها| مقادیر بالای HDL-C در زنان یائسه، افرادی که به طور منظم ورزش می‌کنند، افرادی که دارای وزن مناسب هستند دیده می‌شود. انسولین، استروژن و تیروکسین (T۴) رابطه معکوسی با میزان کلسترول کل دارند. زمانی که میزان سطح استروژن بالا است (در زمان قاعدگی) میزان کلسترول کل کمتر و ترجیحا ۲۰۰ میلی گرم در دسی لیتر است. کلسترول HDL در زمان قاعدگی زنان هم افزایش نشان می‌دهد بر خلاف کلسترول LDL که کاهش نشان می‌دهد. در زیر نحوه اندازه گیری میزان HDL را باهم بررسی می‌کنیم: اندازه گیری کلسترول HDL (HDL CHOLESTEROL) | برای اندازه گیری HDL-C می‌توان از دو روش پرسیپیتاسیون و یا روش هموژنوس استفاده کرد که هر کدام را شرح می‌دهیم. واکنش رسوبی یا The Precipitation Reaction| از دکستران سولفات (dextran sulfate)، پلی اتیلن گلیکول (polyethylene glycol) و یا فسفوتگستیک اسید همراه با منزیم کلراید برای LDL، VLDL از نمونه سرم ناشتا را رسوب می‌دهد و HDL درسوپرناتانت بای می‌ماند. مداخلات|وجود شیلومیکرون که در خون ناشتا وجود دارد باعث مداخله در این تست خواهد شد. نمونه مناسب| سرم وپلاسما (بستگی به محلولی دارد که برای رسوب استفاده می‌شود). ۱۰ تا ۱۰ ساعت فرد باید ناشتا باشد. مقادیر نرمال : مرد (۲۵ تا ۲۹ سال): ۳۱ تا ۶۳ میلی‌گرم‌در ‌دسی‌لیتر زن (۲۵ تا ۲۹ سال): ۳۷ تا ۸۳ میلی‌گرم‌در ‌دسی‌لیتر برای مرد‌ها با توجه به میزان خطر بودن: کم: بیشتر از ۵۹ میلی‌گرم‌در ‌دسی‌لیتر زیاد: کمتر از ۴۰ میلی‌گرم‌در ‌دسی‌لیتر روش Homogeneous | برای اندازه گیری Homogeneous HDL-C از رسوب استفاده نمی‌کنیم بلکه نیاز به سانتریفیوژ سرم داریم. این باعث می‌شود تا به دست اوردن HDL از نمونه راحت‌تر شود. یکی از این روش‌ها استفاده از آنتی بادی بر علیه آپولیپوپروتئین B-۱۰۰ برای اتصال به LDL وvldl می‌باشد. این روش باعث می‌شود که HDL برای مرحله دوم یعنی استفاده از ریجنت‌ها مخصوص برای انالیز کلسترول مناسب باشد. در روش دیگری، محلول پلی یانون سنتتیک به VLDL و LDL باند می‌شود و ان‌ها را از تولید محصول رنگی طی واکنش متوقف می‌کند. سپس ریجنت دومی برای واکنش با HDL-C وارد واکنش می‌شود و باعث تولید محصول رنگی می‌شود. نمونه| سرم و یا پلاسما (بستگی به روش استفاده دارد.) مقادیر نرمال: مرد (۲۵ تا ۲۹ سال): ۳۱ تا ۶۳ میلی‌گرم‌در ‌دسی‌لیتر زن (۲۵ تا ۲۹ سال): ۳۷ تا ۸۳ میلی‌گرم‌در ‌دسی‌لیتر برای مرد‌ها با توجه به میزان خطر بودن: کم: بیشتر از ۵۹ میلی‌گرم‌در ‌دسی‌لیتر زیاد: کمتر از ۴۰ میلی‌گرم‌در ‌دسی‌لیتر چگونه سطح HDL  را افزایش دهیم؟ 1-تمرینات و ورزشهای ایروبیک(هوازی) منظم. مثل: دویدن، شنا، راه رفتن سریع، دوچرخه سواری. 2- کاهش جربیهای زاید بدن. 3- قطع استعمال سیگار. ن کته:مصرف الکل نیز سطح HDL را افزایش میدهد اما از آنجایی که الکل خود برای بدن مضر است مصرف آن به منظور افزایش سطح HDL توصیه نمیگردد

وسایل مورد نیاز: سمپلر 500،200و 1000 میکرولیتری- لوله ی آزمایش- سرم-محلول استاندارد-محلول رسوب دهنده R1 معرف کلسترول بن ماری 37 درجه-سانتریفوژ-دستگاه اسپکتوفتومتری و شیکر

روش انجام آزمایش: با سمپلر 200 میکرولیتری از سرم بر میداریم و در لوله ی آزمایش   میریزیم.500 میکرولیتر از محلول رسوب دهنده ی R1 رو در همان لوله ی آزمایش میریزیم.سپس به مدت 5 دقیقه در دستگاه سانتریفوژ قرار میدهیم.بعد از سانتریفوژ کردن رسوب در زیر لوله ی ازمایش تشکیل میشود،محلول روی لوله ی آزمایش را با سمپلر 200 میکرولیتری برداشته و آن را در لوله ی T  میریزیم. با همان سمپلر از محلول استاندارد بر داشته و در لوله ی S میریزیم.با سمپلر 1000 میکرولیتری ،1CC  از معرف کلسترول برداشته و دو بار یعنی 2CCدر لوله های T و S و B میریزیم.

لوله ها رو با استفاده از دستگاه شیکر ، محلول رو شیک میکنیم.بعد سه محلول را به مدت 10 دقیقه در بن ماری قرار میدهیم

بعد از 10 دقیقه محلول ها را از بن ماری در اورده و با استفاده از دستگاه اسپکتوفتومتری غلظت محلول ها را میخوایم

طریقه ی استفاده از دستگاه اسپکتوفتومتر:دستگاه را تنظیم میکنیم 2)دکمه ی SET-ZERO رو میزنیم تا دستگاه رفرش شود 3)محلول B  را در ظرف کووت میریزیم و درون دستگاه قرار میدهیم 4)دکمه ی BLANK T100 رو میزنیم 5)کووت را از دستگاه در آورده و آن را آب شستشو میدهیم. درون کووت یکی از محلول های S میریزیم و دکمه ی ABS-START   رو میزنیم و عددی که ثبت شده را یادداشت میکنیم. 6)برای محلول T هم همین کار رو میکنیم و عدد روی دستگاه رو میخونیم

ODT=0/082

ODS=0/091

CS=52.5